脂質(zhì)體3000通常指代一類在生物醫(yī)學(xué)和化妝品領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的高性能脂質(zhì)體遞送系統(tǒng),其名稱中的“3000”往往代表特定的粒徑規(guī)格(如平均粒徑約為300納米或3微米,視具體廠家標(biāo)準(zhǔn)而定)或特定的配方代號(hào)。作為一種模擬細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的納米載體,脂質(zhì)體3000由磷脂雙分子層構(gòu)成,能夠包裹水溶性、脂溶性及兩親性物質(zhì),實(shí)現(xiàn)活性成分的高效傳輸與靶向釋放。
在核心結(jié)構(gòu)上,脂質(zhì)體3000利用天然磷脂(如大豆卵磷脂、膽固醇等)自組裝形成球形囊泡。這種獨(dú)特的雙層膜結(jié)構(gòu)使其具有優(yōu)異的生物相容性和低毒性,進(jìn)入人體后能迅速被代謝吸收,不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)。其“3000”特性可能特指其優(yōu)化的粒徑分布,確保了j佳的滲透性和組織穿透力。
一、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染(常用)
瞬時(shí)過(guò)表達(dá):轉(zhuǎn)入目的基因、GFP熒光標(biāo)記質(zhì)粒、熒光素酶報(bào)告基因,做蛋白表達(dá)、啟動(dòng)子活性檢測(cè);
大片段質(zhì)粒、多質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,適合通路共表達(dá)驗(yàn)證;
CRISPR基因編輯:轉(zhuǎn)Cas9質(zhì)粒+sgRNA載體,構(gòu)建基因敲除細(xì)胞模型;
轉(zhuǎn)抗性篩選質(zhì)粒(嘌呤霉素、潮霉素等),構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株;
轉(zhuǎn)shRNA質(zhì)粒,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)效基因沉默。
二、各類RNA轉(zhuǎn)染
siRNA轉(zhuǎn)染:內(nèi)源基因敲低,驗(yàn)證基因缺失后的細(xì)胞表型;
miRNA模擬物/抑制劑轉(zhuǎn)染:研究微小RNA調(diào)控靶基因與細(xì)胞通路;
mRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染:快速表達(dá)目標(biāo)蛋白,無(wú)基因組整合風(fēng)險(xiǎn)。
三、DNA+RNA共轉(zhuǎn)染(功能回補(bǔ)實(shí)驗(yàn))
先用siRNA敲低內(nèi)源基因,再轉(zhuǎn)不受干擾的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,rescue回補(bǔ)實(shí)驗(yàn),明確基因功能。
四、難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、干細(xì)胞專屬應(yīng)用(核心優(yōu)勢(shì))
對(duì)常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑難以操作的細(xì)胞效率突出:
各類原代細(xì)胞、腫瘤原代分離細(xì)胞;
iPSC誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞hESC、間充質(zhì)干細(xì)胞;
HepG2、CHO、懸浮細(xì)胞等常規(guī)低轉(zhuǎn)染效率細(xì)胞;
多用于干細(xì)胞重編程、細(xì)胞分化、腫瘤機(jī)制研究。
五、下游配套實(shí)驗(yàn)支撐
轉(zhuǎn)染后可開(kāi)展各類分子細(xì)胞實(shí)驗(yàn):
qPCR基因定量、Western Blot蛋白檢測(cè)、免疫熒光、雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖/凋亡/侵襲實(shí)驗(yàn)、Co-IP互作驗(yàn)證、基因編輯單克隆篩選等。
